0.2um NC 硝酸纤维素蛋白质印迹膜，AGWB-30040
产品介绍
本产品是一种由高纯度的硝酸纤维素制成的微孔滤膜（进口原料），专为蛋白质印迹（Western Blotting）实验设计。其标准的 0.2μm 孔径能够高效地吸附分子量较小的蛋白质（通常建议用于分子量 小于 20 kDa 的蛋白），同时也能出色地结合各类分子量范围的蛋白质，提供高分辨率、低背景的检测结果。
硝酸纤维素膜因其与蛋白质通过疏水作用和静电作用产生的高亲和力而闻名，是生命科学研究、医学诊断、药物开发等领域中蛋白质检测和分析的理想固相支持物。
产品特点
1. 高结合容量: 对蛋白质具有极高的结合能力（通常 >80 μg/cm²），确保信号强度，尤其适用于低丰度蛋白的检测。
2. 高信噪比: 本底背景低，能获得清晰、锐利的印迹条带，提高实验结果的可信度。
3. 广泛兼容性: 与各种检测系统兼容，包括化学发光（ECL）、化学荧光（ECF）、显色法（DAB/NBT/BCIP）以及放射性标记和荧光标记。
4. 机械强度适中: 具有足够的柔韧性和强度，便于在实验过程中进行操作、清洗和孵育。
5. 经济高效: 与其他类型的印迹膜相比，成本效益高，是常规 Western Blot 实验的首选。
使用方法（仅供参考）
重要提示： 操作膜时请始终佩戴无粉手套或使用平头镊子，以免皮肤油脂和蛋白污染膜表面。
A. 转膜前准备
1. 裁剪: 根据凝胶大小，用干净的剪刀或刀片裁剪适当尺寸的NC膜和滤纸。
2. 平衡（可选但推荐）: 将裁剪好的NC膜、滤纸和凝胶浸泡在转移缓冲液中，平衡10-15分钟。这有助于去除膜表面的气泡并使pH环境一致。
B. “三明治”组装（以湿转法为例）
1. 在转移夹板上按以下顺序放置各层（从负极（-）到正极（+））：
海绵垫
三层滤纸
凝胶
0.2μm NC膜
三层滤纸
海绵垫
2. 在放置每一层时，用玻璃管或试管小心滚压，以排除所有气泡，确保紧密接触。
3. 扣紧转移夹，放入转移槽中，确保 NC膜面向正极（+），凝胶面向负极（-）。
C. 转膜
1. 在转移槽中加满预冷的转移缓冲液。
2. 根据目标蛋白的分子量，在恒压或恒流条件下进行电转。对于0.2μm孔径的膜，转印小分子量蛋白时，建议使用较低的电流/电压和较长的转印时间，以防止小蛋白穿透膜。例如：恒压100V，冰上转印60-90分钟。
3. 转印结束后，关闭电源。
D. 转膜后检测与封闭
1. 可逆染色（可选）: 可使用丽春红S溶液对膜进行短暂染色，以观察总蛋白转印效率，然后用去离子水或TBST洗脱染料。
2. 封闭: 将膜完全浸入 5% 脱脂牛奶（溶于TBST或PBST）或 3-5% BSA 的封闭液中。室温下在摇床上缓慢摇动封闭 1-2小时。BSA通常用于磷酸化蛋白的检测，以减少非特异性背景。
3. 一抗孵育: 用封闭液或抗体稀释液稀释一抗。将膜与一抗溶液在4°C下孵育过夜，或在室温下孵育1-2小时。
4. 洗涤: 用TBST缓冲液洗涤膜3-5次，每次5-10分钟，以去除未结合的一抗。
5. 二抗孵育: 用封闭液或抗体稀释液稀释HRP（辣根过氧化物酶）或其它标记的二抗。室温下在摇床上孵育 1小时。
6. 洗涤: 再次用TBST缓冲液充分洗涤膜3-5次，每次5-10分钟，彻底去除未结合的二抗。
E. 检测
根据二抗的标记物选择相应的检测方法：
化学发光法（ECL）: 将ECL底物A液和B液等体积混合后，均匀滴加到膜上，反应1-2分钟后，用化学发光成像系统采集信号。
显色法: 将膜与相应的显色底物（如DAB）孵育，直到条带显现，然后用去离子水终止反应。
注意事项
1. 避免污染: 全程佩戴手套，使用洁净的器具接触膜。
2. 防止干燥: 在任何时候都不要让膜完全干燥，否则会导致蛋白质不可逆地变性并结合在膜上，导致高背景和信号丢失。孵育和洗涤步骤间应保持膜湿润。
3. 避免气泡: 在组装“三明治”时，务必彻底排除所有气泡，否则会导致转印失败，在气泡处形成空白区。
4. 优化转印条件: 转印条件是实验成功的关键。对于小分子量蛋白（<20 kDa），强烈建议使用0.2μm孔径的膜，并优化转印时间和电流/电压，防止蛋白穿透。
5. 封闭液选择: 选择合适的封闭剂。脱脂牛奶成本低，但对于某些抗体（如抗生物素蛋白、抗磷酸化蛋白）可能产生高背景，此时应选用BSA。
6. 洗涤充分: 充分的洗涤是获得低背景的关键，切勿缩短洗涤时间。
7. 储存条件: 本产品应密封储存于室温、干燥、避光的环境中。避免与有机溶剂、强酸、强碱接触。
常见问题解答
Q1: 为什么我的膜背景很高？
A: 可能原因包括：① 封闭不充分或时间不够，可尝试延长封闭时间或更换封闭剂（如从牛奶换成BSA）；② 一抗或二抗浓度过高，需进行抗体滴定优化；③ 洗涤不彻底，请确保洗涤液体积充足并洗涤足够次数；④ 膜在实验过程中曾部分干燥。
Q2: 为什么信号很弱甚至没有信号？
A: 可能原因包括：① 蛋白上样量不足或转印效率低；② 一抗/二抗失效或浓度过低；③ 转印条件不当，特别是对于大分子量蛋白，未能有效转出凝胶；④ 检测底物失活或曝光时间过短；⑤ 对于小分子量蛋白，使用了孔径过大的膜（如0.45μm）导致蛋白穿透。
Q3: 0.2μm 和 0.45μm 的NC膜该如何选择？
A: 0.2μm 膜 推荐用于分子量 小于 20 kDa 的小分子蛋白，以防止其穿透膜导致信号损失。0.45μm 膜 适用于大多数 大于 20 kDa 的蛋白质，是常规实验的通用选择。
Q4: 转膜后用丽春红染色看不到条带，是什么问题？
A: 这通常表明转印失败。请检查：① “三明治”组装是否正确，特别是膜与凝胶的朝向；② 电极是否接反；③ 转印缓冲液是否配制正确；④ 电源是否正常工作。
Q5: 膜可以重复使用吗？
A: 通常不推荐。因为 stripping（洗脱抗体）过程可能无法完全去除结合的抗体，并且会损伤膜上结合的蛋白，影响后续结果。建议每次实验使用新的膜。
产品声明
本产品仅限于科研，如需储存珍贵样本，请自行小规模尝试后大批量实验，产品售后仅限产品本身，无其他任何连带责任，请须知。
本产品仅供研究使用，不适用于临床诊断或治疗。
