产品详情
【产品简介】
Augene Tech 的 RNAisol 提取试剂是即用型细胞和组织总 RNA 提取试剂。在溶解的样品中，RNAisol 提取试剂可保持 RNA 的完整性，同时能破坏细胞及溶解细胞成分。加入 Buffer EX 或氯仿离心后，样本溶解物分离成水相和有机相，RNA 存在于水相中，DNA 和蛋白质处于有机相及相间。水相中的 RNA 可通过异丙醇沉淀回收；如有需要，有机相及相间中的 DNA 和蛋白质也可相继通过沉淀回收。
RNAisol 提取试剂的总 RNA 可用于 Northern blot 分析、斑点杂交、poly（A）+ 选择、体外翻译、RNA 酶保护分析和分子克隆。RNAisol 试剂可除去样本中大部分 DNA，但不能彻底去除 DNA，因此在 RT-PCR 反应中，如果设计的两条引物位于单个外显子中时，需用 DNase I处理分离出的 RNA，或者选择含有 DNA 酶消化步骤的 cDNA 第一链合成试剂盒合成 cDNA。
【产品特点】
1. 即用型：无需配制，直接使用；
2. 一管多提：可同时提取 RNA、DNA 和蛋白质；
3. 保持完整性：有效抑制内源 RNase 活性，保持 RNA 完整性；
4. 适用广泛：适用于人、动物、植物、酵母、细菌等多种样本。
【储存条件】
- 保存：2–8℃ 保存，有效期 3 年。
- 运输：室温运输，收货后立即 2–8℃ 存放。
- 注意事项：若出现沉淀，可 37℃ 水浴加热溶解后使用。
【产品组成】
本品为即用型总 RNA 提取试剂，主要成分为苯酚、异硫氰酸胍等。
【自备试剂与物品】
1. Buffer EX 或氯仿、异丙醇、75% 乙醇（用 DEPC 处理水配制）、RNase-free 水或 DEPC 处理水；
2. RNase-free 的 1.5 mL 离心管；
3. 移液器及含滤芯的 RNase-free 吸头；
4. 一次性手套及防护用品；
5. 旋涡振荡器、台式离心机；
6. 液氮与研钵（组织提取用）、18–25 号针头注射器（动物组织提取用）；
7. 可能需要 Carrier RNA、PBS 溶液、无水乙醇、0.1 M 柠檬酸钠（溶于 10% 乙醇）、8 mM NaOH、5 mL 离心管、0.3 M 盐酸胍（溶于 95% 乙醇）、1% SDS。
【使用说明】
一、RNA 提取步骤（以 1 mL RNAisol 试剂为例）
1. 不同来源样品的处理
- 人或动物组织：取 50–100 mg 组织粉末，加入 1 mL RNAisol 试剂，吹打或旋涡振荡至无明显团块；也可直接称取组织加 1 mL RNAisol 试剂匀浆。
- 贴壁培养细胞：每 10 cm² 加入 1 mL RNAisol 试剂，吹打使细胞溶解，转移至 1.5 mL 离心管。
- 悬浮培养细胞：离心收集 5–10×10⁶ 细胞，加 100 μL PBS 悬浮，加入 1 mL RNAisol 试剂，吹打溶解。
- 植物/酵母/细菌：取约 100 mg 粉末，加入 1 mL RNAisol 试剂，吹打溶解。酵母/细菌需先经酶处理。
2. 可选步骤：若样品含较多蛋白质、脂肪、多糖，可 12000×g 离心 5 分钟，取上清。
3. 分相：加入 200 μL Buffer EX 或氯仿，盖紧管盖，用力摇晃 15 秒，12000×g 离心 15 分钟。
4. 沉淀 RNA：取新 RNase-free 1.5 mL 离心管，加入 500 μL 异丙醇，将清澈上相转移至其中，混匀，12000×g 离心 10 分钟。
5. 洗涤：弃上清，加入 1 mL 75% 乙醇，旋涡振荡悬浮沉淀，7500×g 离心 5 分钟。
6. 干燥：弃上清，低速离心数秒，吸尽残留乙醇，室温开盖静置 5 分钟干燥 RNA。
7. 溶解：加入 50–100 μL RNase-free 水溶解 RNA，立即用于后续实验或储存于 -70℃ 以下。
二、DNA 提取步骤（衔接 RNA 提取步骤 3）
1. 移去水相后，加入 300 μL 无水乙醇，颠倒混匀，室温静置 2–3 分钟，2000×g 离心 5 分钟，吸弃上清。
2. 加入 1 mL 0.1 M 柠檬酸钠（溶于 10% 乙醇），室温静置 30 分钟，2000×g 离心 5 分钟，弃上清。
3. 重复步骤 2 一次。
4. 加入 1.5 mL 75% 乙醇悬浮沉淀，室温静置 10–20 分钟，2000×g 离心 5 分钟。
5. 弃上清，低速离心，吸尽残留乙醇，室温干燥 5–15 分钟。
6. 加入 200–600 μL 8 mM NaOH 溶解 DNA，储存于 -20℃ 以下。
三、蛋白质提取步骤（衔接 DNA 提取步骤）
1. 取 5 mL 离心管，加入 1.5 mL 异丙醇，将苯酚-乙醇上清加入，混匀，室温静置 10 分钟，12000×g 离心 10 分钟，弃上清。
2. 加入 2 mL 0.3 M 盐酸胍（溶于 95% 乙醇），旋涡振荡悬浮沉淀，室温静置 20 分钟，7500×g 离心 5 分钟，弃上清。
3. 重复步骤 2 两次。
4. 加入 2 mL 无水乙醇，旋涡振荡混匀，室温静置 20 分钟，7500×g 离心 5 分钟。
5. 弃上清，低速离心，吸尽残留乙醇，室温干燥 5–10 分钟。
6. 加入 200 μL 1% SDS，反复吹打帮助溶解（可 50℃ 孵育）。
7. 10000×g 离心 10 分钟，取上清，储存于 -20℃ 以下。
【常见问题与分析】
问题 | 可能原因 | 解决方案 |
RNA降解 | 样本保存不当；内源/外源RNase污染 | 液氮速冻或RNAisol处理后-70℃保存；使用RNase-free耗材及试剂 |
RNA得率低 | 多糖含量高；样本RNA含量低；裂解不充分；沉淀未完全溶解 | 选用植物专用试剂盒；增加样本量；延长研磨时间；增加溶解体积或时间 |
基因组DNA残留 | 样本用量过多；吸取水相时带入中间相；分相不完全 | 减少样本量；小心吸取水相；加入Buffer EX后用力摇晃混匀 |
后续实验效果不佳 | 盐分/乙醇残留；RNA降解；反转录模板过多 | 增加75%乙醇洗涤次数；不可省略步骤6；减少模板量或添加RNase H处理 |
【注意事项】
1. 仅限科研使用，不得用于临床诊断或治疗。
2. RNAisol 试剂含苯酚，具有腐蚀性，操作时请穿实验服、戴手套和护目镜。
3. 避免 RNase 污染，使用 RNase-free 耗材及试剂。
4. 氯仿挥发性强且有毒性，使用时应于化学通风橱中操作。
5. 提取的 RNA 应储存于 -70℃ 以下，避免反复冻融。
6. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。