Puromycin

【产品简介】

Augene Tech 的嘌呤霉素（Puromycin）是一种氨基核苷类抗生素，通常以二盐酸盐形式提供。在生物学研究中，嘌呤霉素作为氨酰-tRNA（aminoacyl-tRNA）3'末端的结构类似物，能够非特异性地与延伸中的多肽链结合，导致蛋白质翻译过程的提前终止，从而抑制蛋白质合成。

在细胞培养中，嘌呤霉素是一种高效、快速的筛选试剂，广泛用于筛选和建立表达嘌呤霉素抗性基因（pac）的哺乳动物稳定细胞株。未携带抗性基因的细胞会因蛋白质合成受阻而迅速死亡；而 pac 基因编码的嘌呤霉素 N-乙酰转移酶（Pac）可通过对嘌呤霉素进行乙酰化修饰，破坏其核糖体结合能力，从而赋予细胞抗性。此外，嘌呤霉素也可作为一种已知的损伤剂，用于诱导哺乳动物细胞发生凋亡。

 【产品参数】

【产品特点】

1. 高纯度：纯度 ≥99%，批次间稳定性好，实验重复性高。

2. 高效筛选：作用迅速，能快速杀死未携带抗性基因的细胞，缩短稳定细胞株的筛选周期。

3. 广谱适用：对绝大多数哺乳动物细胞具有极高的细胞毒性，筛选效率高。

 【储存条件】

- 保存：-20℃ 避光、干燥保存，有效期见外包装标签。

- 运输：冰袋或蓝冰运输，收货后立即 -20℃ 存放。

- 储存液：配制成母液后，需 0.22 μm 过滤除菌，并分装于 -20℃ 冻存，避免反复冻融。

 【产品组成】

本品为嘌呤霉素二盐酸盐粉末，20 mg/管。

 【使用说明】（仅供参考）

一、母液配制

1. 溶解：将 20 mg 嘌呤霉素粉末溶解于 2 mL 无菌去离子水或 PBS 中，配制成 10 mg/mL 的母液。

2. 除菌：使用 0.22 μm 滤膜过滤除菌。

3. 分装保存：按单次用量分装，于 -20℃ 避光保存，避免反复冻融导致效价降低。

二、推荐工作浓度参考

嘌呤霉素的作用浓度需根据具体的细胞种类、生长状态及传代倍数等进行调整。一般哺乳动物细胞的推荐浓度在 1–10 μg/mL。部分常见细胞系参考浓度如下：

三、杀伤曲线（Kill Curve）的建立

对于首次使用的实验体系，必须建立杀伤曲线以确定最佳筛选浓度：

1. 铺板：以 20%–25% 的细胞密度铺板，准备至少 5 个浓度梯度的孔和对照组，过夜培养。

2. 加药：准备含不同浓度嘌呤霉素（如 0、1、2.5、5、7.5、10 μg/mL）的筛选培养基，替换原培养基。

3. 换液与观察：约每 2–3 天更换一次新鲜含药培养基。每日显微镜下观察细胞存活状态。一般 2–3 天能杀死绝大多数细胞，耐药性强的细胞需 4–10 天。

4. 确定浓度：选择能够杀死绝大多数细胞（存活率 < 5%）的最低浓度作为后续正式筛选的工作浓度。也可通过 CCK-8 试剂盒读取细胞活力，经四参数 Logistic 拟合后计算。

 四、稳定细胞株的筛选

1. 转染质粒 48–72 小时后，更换为含最佳工作浓度嘌呤霉素的新鲜培养基。

2. 建议设置未转染的正常细胞对照组。每 2–3 天换液，2–10 天后，当对照组细胞 100% 死亡时，实验组中存活的即为阳性细胞株。

3. 防假阳性：为防止阳性细胞株在表达抗性基因不充分时被杀伤，可先在无抗培养基中培养一段时间，再加入含嘌呤霉素的培养基进行筛选。

4. 维持培养：待细胞稳定生长后，嘌呤霉素的浓度可减半用于后续的长期维持培养。

 【注意事项】

1. 本产品仅供科研使用，不得用于临床诊断或治疗。

2.本产品对人体有一定的毒害作用，请注意适当防护，避免直接接触皮肤或吸入体内。操作时请穿戴实验服、手套和口罩。

3.在无血清培养基中使用时，应适当减少用量，以免造成过强的细胞毒性。

4. 细胞处于分裂活跃期时，抗生素作用最明显。细胞过于密集会明显降低抗生素效力，建议细胞密度不要超过 25%，过密可消化传代后再加药。

5. 实验结果受细胞状态、操作手法、培养环境等多种变量影响，相关售后处理仅限产品本身，不涉及其他连带赔偿。