产品详情
【产品简介】
Augene Tech 的 Western 快速转膜液（10×）是一种 10 倍浓缩的安全无毒害的用于 Western 湿法快速转膜的缓冲液。本产品为 10 倍浓缩溶液，使用前需用适当水和乙醇稀释至 1×。本产品不含有毒有害组分，无需使用剧毒的甲醇等试剂。使用本产品可在 15-30 分钟内完成转膜过程，产热少，能将 PAGE 凝胶上的蛋白高效转移至 PVDF 膜或 NC 膜上。
【产品特点】
1. 快速高效：15-30 分钟完成转膜，节省实验时间；
2. 安全无毒：不含甲醇等有毒有害组分，可用乙醇替代；
3. 转移效率高：对分子量跨度较大的蛋白有很好的转移效率，有效解决大小蛋白不能在同一张膜上同时转移的问题；
4. 兼容性强：兼容 Laemmli 胶、预制胶、Bis-Tris 胶等多种凝胶；
5. 产热少：转膜过程中产热小，内外槽均无须冰浴。
【储存条件】
- 保存：室温或 4℃ 密封保存，有效期 12 个月。
- 运输：常温运输，避免高温及阳光直射。
- 注意事项：环境温度较低时可能会有结晶析出，可 37℃ 水浴加热助溶，待溶解完全后再行稀释使用。
【产品组成】
本品为 10× 浓缩液，含 Tris、甘氨酸及 SDS 等组分，不含甲醇。
【使用说明】
1、1×工作液配制
（1）按比例配制 1× 工作液（以 1 L 为例）：取 100 mL 10× 转膜液，加入200mL 无水乙醇，补加超纯水至 1L（即 700 mL），混匀即可。
（2）充分混匀后即可使用。配制好的 1× 工作液建议现配现用。
> 注：乙醇浓度一般控制在 10%-20% 之间。如使用含水乙醇，请按照实际浓度计算加入量。
2、转膜前准备
（1） 将滤纸和海绵浸泡在 1× 快速转膜液中，完全浸湿，平衡 5 分钟。
（2） PVDF 膜使用前用无水甲醇润湿 30 秒以上，随后浸泡在 1× 快速转膜液中平衡 5 分钟。
（3） 将凝胶在超纯水中浸泡漂洗 1-2 分钟，去除胶表面的 SDS；随后将凝胶浸泡在 1× 快速转膜液中。
> 注意：水中漂洗时间不宜超过 2 分钟，否则大分子量蛋白可能不能完全转移。
3、湿转法操作
（1） 按照以下顺序做好转印三明治结构：
> 负极（阴极）- 海绵 - 滤纸 - 电泳胶 - PVDF/NC膜 - 滤纸 - 海绵 - 正极（阳极）
（2）用滚轴彻底赶走凝胶与膜之间的气泡，适当补加 1× 快速转膜液保持湿润。
（3） 将三明治结构放于转移槽中，灌满 1× 快速转膜液。
（4） 恒流转膜推荐条件：
条件 | 恒电流 | 转移时间 |
常规条件 | 400 mA | 20-25分钟 |
快速条件 | 500 mA | 15-20分钟 |
- <100 kDa 蛋白：15 分钟即可完全转印
- 100-150 kDa 蛋白：20-25 分钟
- >150 kDa 蛋白：建议延长 5-10 分钟
- 凝胶浓度 8%：约 15 分钟
- 凝胶浓度 10-12%：约 20 分钟
- 凝胶浓度 >12%：建议延长 5-10 分钟
> 注：使用 500 mA 时推荐使用外置冰浴；400 mA 可不使用外置冰浴，仅使用内置冰盒即可。
【常见问题及优化方案】
1. 转膜不充分：若转移槽有盐沉积，需彻底用超纯水清洗转移槽。
2. 转膜不充分：若膜、滤纸、凝胶未充分平衡，应在 1× 转膜液中平衡 5 分钟，震荡平衡效果更佳。
3. 转膜不充分：若 PVDF 膜未用甲醇预处理，需用甲醇彻底润湿后，再于 1× 转膜液中平衡 5 分钟。
4. 转膜不充分：若转膜时间不充分，应适当延长转膜时间。
5. 转膜不均匀：若凝胶和膜之间有气泡，需用滚轴彻底赶走气泡。
6. 转膜不均匀：若膜未充分浸湿，应确保膜完全浸没在转膜液中。
7. 小分子量蛋白丢失：若漂洗时间过长，凝胶在水中漂洗时间应控制在 1-2 分钟内。
【注意事项】
1. 仅限科研使用，不得用于临床诊断或治疗。
2. 本产品转膜过程中产热小，内外槽均无须冰浴。
3. 本产品不含 SDS，蛋白分子量较大（>150 kDa）或疏水性较强时，可适当添加少量 SDS（参考工作浓度 0.025-0.1%）以增加转膜效果。
4. 使用后请及时拧紧瓶盖，密封保存，防止污染。
5. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。