产品详情
【产品简介】
Augene Tech 的人转化生长因子β1（Transforming Growth Factor Beta 1, TGF-β1）ELISA 检测试剂盒，适用于体外定量检测血清、血浆、组织匀浆、细胞培养上清及其他生物液体样本中人TGF-β1的含量。TGF-β1是一种多功能细胞因子，由巨噬细胞、血小板和成纤维细胞等多种细胞产生，在调控细胞生长、分化、迁移及免疫反应中发挥关键作用，其失调与纤维化、癌症及自身免疫性疾病密切相关。本产品仅供科研使用，不用于临床诊断。
【产品特点】
高灵敏度：最低检测限可达 8.6 pg/mL；
高特异性：与其它类似物无明显交叉反应；
精密度好：板内变异系数 < 5%，板间变异系数 < 5%；
操作简便：双抗体夹心法，流程标准化，适合常规实验室操作；
应用广泛：适用于血清、血浆、细胞培养上清等多种样本类型。
【储存条件】
保存：2–8℃ 避光保存，有效期 6 个月（未开封）；-20℃ 保存可延长至 12 个月。
运输：冰袋或蓝冰运输，收货后立即 2–8℃ 存放。
注意事项：
试剂盒从冷藏环境中取出后，应在室温平衡 20 分钟后方可使用；
从冰箱取出的浓缩洗涤液如有结晶，属正常现象，水浴加热使结晶完全溶解后再使用；
实验中不用的板条应立即放回自封袋中，密封（低温干燥）保存。
【产品组成】
组分 | 96 T 规格 | 备注 |
|---|---|---|
预包被微孔板 | 1板（8孔×12条） | 预包被人TGF-β1捕获抗体 |
重组人TGF-β1标准品（冻干） | 2瓶 | 复溶后浓度 4 ng/mL |
生物素偶联物（100×） | 120 μL | 检测抗体 |
链霉亲和素-HRP（100×） | 150 μL | — |
浓缩检测缓冲液（20×） | 5 mL | 按说明书稀释 |
浓缩洗涤缓冲液（20×） | 50 mL | 按说明书稀释 |
底物溶液（TMB） | 15 mL | 避光保存 |
终止液（1M 磷酸） | 15 mL | — |
TGF-β1活化剂Ⅰ | 2 mL | 用于样本酸激活 |
TGF-β1活化剂Ⅱ | 2 mL | 用于样本中和 |
封板膜 | 6片 | — |
具体组分及数量请以产品标签为准。
【样本采集与处理】
1. 血清
将收集于血清分离管的全血标本在室温放置 2 小时或 4℃ 过夜，然后 1000×g 离心 20 分钟，取上清即可。可将上清置于 -20℃ 或 -80℃ 保存，但应避免反复冻融。
2. 血浆
用 EDTA 或肝素作为抗凝剂采集标本，并将标本在采集后的 30 分钟内于 2–8℃ 1000×g 离心 15 分钟，取上清即可检测。可将上清置于 -20℃ 或 -80℃ 保存，但应避免反复冻融。
3. 细胞培养上清
请 1000×g 离心 20 分钟，取上清即可检测。
4. 组织匀浆
用预冷的 PBS（0.01 M, pH 7.4）冲洗组织，去除残留血液，称重后将组织剪碎。将剪碎的组织与对应体积的 PBS（一般按 1:9 的重量体积比）加入玻璃匀浆器中，于冰上充分研磨。最后将匀浆液于 5000×g 离心 5–10 分钟，取上清检测。
5. 样本活化
TGF-β1在样本中主要以无活性的潜在形式存在，检测前需进行酸激活处理：
取 20 μL 样本，加入 20 μL 1N HCl，混匀，室温孵育 10 分钟；
加入 20 μL 1N NaOH 中和，混匀；
用检测缓冲液稀释至适当倍数后上样检测。
注：活化后的样本应立即检测，不宜长时间放置。
【使用说明】
一、试剂准备
1× 检测缓冲液配制：将 20× 浓缩检测缓冲液用蒸馏水按 1:20 稀释，混匀；
1× 洗涤缓冲液配制：将 20× 浓缩洗涤缓冲液用蒸馏水按 1:20 稀释（如 10 mL 浓缩洗涤液加入 190 mL 蒸馏水），混匀；
1× 生物素偶联物工作液配制：用 1× 检测缓冲液将 100× 生物素偶联物按 1:100 稀释（如 10 μL 加入 990 μL 检测缓冲液），混匀；
1× 链霉亲和素-HRP 工作液配制：用 1× 检测缓冲液将 100× 链霉亲和素-HRP 按 1:100 稀释，混匀。配制好的工作液可在 2–8℃ 保存 8 小时。
二、标准品稀释
将冻干标准品用 1 mL 蒸馏水复溶，室温静置 15 分钟，轻轻混匀，得到 4 ng/mL 标准品溶液；
取 500 μL 标准品溶液，加入 500 μL 1× 检测缓冲液，混匀，得到 2000 pg/mL 标准品；
依次进行 1:2 倍比稀释，制备标准曲线各浓度点（推荐浓度梯度：2000、1000、500、250、125、62.5、31.25 pg/mL）。
三、操作步骤
加样：设置标准品孔和样本孔。标准品孔各加不同浓度的标准品 100 μL；样本孔加活化并稀释后的待测样本 100 μL；空白孔加 1× 检测缓冲液 100 μL。
温育：用封板膜封板，37℃ 温育 2 小时。
洗涤：弃去液体，每孔加满洗涤液，静置 30 秒后甩尽，重复 3 次，拍干。
加生物素偶联物：每孔加入 100 μL 1× 生物素偶联物工作液。
温育：37℃ 温育 1 小时。
洗涤：同步骤 3，重复 3 次。
加酶：每孔加入 100 μL 1× 链霉亲和素-HRP 工作液。
温育：37℃ 温育 30 分钟。
洗涤：同步骤 3，重复 5 次。
显色：每孔加入底物溶液 90 μL，37℃ 避光孵育 15–20 分钟。
终止：每孔加入终止液 50 μL，终止反应（蓝色立即转为黄色）。
测定：以空白孔调零，在 450 nm 波长处依序测量各孔的吸光度（OD 值）。测定应在加终止液后 15 分钟内完成。
四、结果计算
以标准品浓度为横坐标，OD 值为纵坐标，绘制标准曲线（推荐使用四参数Logistic曲线拟合或线性回归）。根据样品的 OD 值，在标准曲线上查得对应浓度。计算所得浓度需乘以样本活化及稀释的倍数，即为样本中TGF-β1的实际浓度。
【注意事项】
仅限科研使用，不得用于临床诊断或治疗。
试剂盒各组分应在有效期内使用，不同批号试剂请勿混用。
严格按照说明书中标明的时间、加液量及顺序进行温育操作。
所有液体组分使用前充分摇匀。
TMB 显色剂为光敏物质，操作时需避光。
终止液含稀磷酸，操作时请戴手套和护目镜，避免接触皮肤。
洗涤过程中应确保每次拍干，残留洗涤液会影响检测精度。
样本活化是TGF-β1检测的关键步骤，务必严格按照活化流程操作，否则可能导致结果偏低或检测不到。
待测样品若超出标准曲线检测范围，应适当稀释后重新测定。
为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。