产品详情
【产品简介】
Augene Tech 的小鼠可溶性淀粉酶前体蛋白β（sAPPβ）ELISA 检测试剂盒，适用于体外定量检测细胞培养上清、血清、血浆及其他生物样本中小鼠 sAPPβ 的含量。sAPPβ 本身不直接形成斑块，但作为 Aβ 上游产物，是阿尔茨海默病（AD）靶向治疗（如 β-分泌酶抑制剂）的重要监测指标。本产品仅供科研使用，不用于临床诊断或治疗。
【检测原理】
本试剂盒采用双抗体夹心法酶联免疫吸附试验（ELISA）。
将捕获抗体包被于酶标板上，捕获样品及标准品中的待测物 sAPPβ。
清洗后，加入生物素标记的检测抗体进行孵育，形成“捕获抗体-抗原-检测抗体”免疫复合物。
随后加入链霉亲和素偶联的辣根过氧化物酶（SA-HRP）进行孵育。
清洗后加入 TMB 显色液，若样本中有待测物则显蓝色，加入终止液停止反应（变为黄色）。
用酶标仪在 450 nm 处测 OD 值，颜色的深浅和样品中 sAPPβ 的含量呈正比，通过标准曲线计算浓度。
【产品特点】
高灵敏度：检测灵敏度可达 1.25 ng/mL；
宽检测范围：2.5–160 ng/mL；
精密度好：板内和板间变异系数均 < 10%；
特异性强：可特异性识别重组小鼠 sAPPβ，与其他相关蛋白无明显交叉反应。
【储存条件】
保存：2–8℃ 避光保存，有效期 6 个月。
运输：冰袋或蓝冰运输，收货后立即 2–8℃ 存放。
注意事项：试剂盒的使用期限不得超过试剂盒标签上的有效期。请勿将试剂与其他批次或来源的试剂混合使用。
【产品组成】
名称 | 48 T 规格 | 储存条件 |
|---|---|---|
预包被酶标板 | 8 × 6 条 | 2–8℃ |
标准品（3.2 μg/mL） | 1 支 × 100 μL | 2–8℃ |
100× 生物素化抗体 | 1 支 × 50 μL | 2–8℃ |
100× SA-HRP | 1 支 × 50 μL | 2–8℃ |
20× 浓缩稀释液/洗涤液 | 1 支 × 15 mL | 2–8℃ |
显色液 A / 显色液 B | 适量 | 2–8℃ 避光 |
终止液 | 适量 | 2–8℃ |
【自备材料】
酶标仪（包含 450 nm 测定波长，同时包含 600–680 nm 校正波长更佳）；
移液器及一次性枪头；蒸馏水或去离子水；
量筒、洗瓶、排枪或自动微孔板清洗机；
水平轨道微孔板振荡器（能够保持 500 ± 50 rpm 的速度）；
用于稀释标准品和样品的试管。
【样本采集与处理】
1. 细胞培养上清液
在 1000×g 下离心 15 分钟去除颗粒，立即测定或分装冻存于 -20℃。避免重复冻融。（由于基质效应，建议预实验确定稀释倍数）
2. 血清
使用血清分离管，使样品在室温下凝结 30 分钟，然后 1000×g 离心 15 分钟。立即取出血清进行测定或分装冻存于 ≤ -20℃。建议 2 倍稀释（如 50 μL 样品 + 50 μL 1× 稀释液）。
3. 血浆
使用 EDTA 或肝素抗凝，收集后 30 分钟内以 1000×g 离心 15 分钟。立即测定或分装冻存于 ≤ -20℃。建议 2 倍稀释。（注：柠檬酸盐抗凝血浆未经验证；溶血样品不适用）
4. 组织匀浆 / 细胞裂解液
用预冷 PBS 冲洗组织或细胞，按比例加入含蛋白酶抑制剂的 PBS 匀浆或裂解。5000×g（组织）或 1500×g（细胞，2–8℃）离心 5–10 分钟，取上清检测。
样品外观：应清澈透明，悬浮物应离心去除。标本溶血会影响检测结果，不宜使用。
【试剂准备】
使用前平衡：将所有试剂置于室温平衡 30 分钟左右。
洗涤液/稀释液（1×）配置：若有晶体析出，37℃ 加热至完全溶解。用蒸馏水按 1:20 稀释。
标准品配置：取 3.2 μg/mL 标准品母液，用 1× 稀释液稀释至 160 ng/mL（如 50 μL 母液 + 950 μL 稀释液）。随后进行 2 倍倍比稀释，制备 7 个浓度梯度：160、80、40、20、10、5、2.5 ng/mL。1× 稀释液作为零浓度（0 ng/mL）。
抗体工作液配置：使用前 10 分钟，将 100× 生物素化抗体离心，用 1× 稀释液稀释成 1× 工作液（当日配当日用）。
酶结合物工作液配置：使用前 10 分钟，将 100× SA-HRP 离心，用 1× 稀释液稀释成 1× 工作液。
【操作步骤】
加样：每孔分别加入 100 μL 不同浓度的标准品及预处理过的待测样品（建议样本至少稀释 1 倍），盖上封板胶纸，37℃ 避光反应 1 小时。洗板 3 次。
加抗体：每孔加入 100 μL 生物素化抗体工作液，盖上封板胶纸，37℃ 避光反应 1 小时。洗板 4 次。
加酶：每孔加入 100 μL SA-HRP 工作液，盖上封板胶纸，37℃ 避光反应 30 分钟。洗板 4 次。
显色：每孔加入 50 μL 显色液 A，随后加入 50 μL 显色液 B，轻轻混匀，37℃ 避光反应 15 分钟。
终止与测定：每孔加入 50 μL 终止液，轻轻混匀，5 分钟内用酶标仪在 450 nm 处测吸光值（OD 值）。
【结果计算】
计算标准品和样本复孔的平均 OD 值，并减去空白孔的 OD 值作为校正值。
以浓度为横坐标，OD 值为纵坐标，绘制四参数逻辑（4-P）标准曲线。
根据样本 OD 值在曲线上查出对应浓度，乘以样本稀释倍数即为实际浓度。若 OD 值高于标准曲线上限，应适当稀释后重测。
【注意事项】
仅限科研：本产品仅供科研使用，不得用于临床诊断或治疗。
安全防护：终止液为稀硫酸（具腐蚀性），显色液B具刺激性，操作时请穿戴实验服、手套和口罩。
防交叉污染：加样必须更换枪头，试剂使用独立容器，混合蛋白溶液时避免起泡。
规范加样与孵育：确保试剂连续加入孔中，孵育时务必贴紧封板膜。
洗板技巧：自动洗板机洗涤时，建议加入洗液后浸泡30秒，或在步骤间将板旋转180度以提高精度。
显色与终止：显色剂需避光且加入前应保持无色；加入终止液后孔内颜色应从蓝色变为黄色（若呈绿色说明未混匀）。
结果差异：实验员手法、移液/洗涤技术、温度及试剂批次等变化均可能导致结果差异，请严格按说明书规范操作。