产品详情
【产品简介】
Augene Tech 的 Cell Counting Kit-8（CCK-8），适用于细胞增殖与细胞毒性的快速检测，基于水溶性四唑盐 WST-8 原理。WST-8（2-(2-甲氧基-4-硝苯基)-3-(4-硝苯基)-5-(2,4-二磺基苯)-2H-四唑单钠盐）在电子耦合剂 1-Methoxy PMS 存在下，可被活细胞线粒体内的脱氢酶还原生成高度水溶性的橙黄色甲瓒（formazan）产物，颜色深浅与活细胞数量成正比。本试剂为即用型溶液，无需预配，直接加入细胞培养液中，适用于药物筛选、细胞增殖测定、细胞毒性测定、肿瘤药敏试验及生物因子活性检测等。
【产品特点】
1. 即用型：单瓶预配溶液，无需配制或预混合，开瓶即用；
2. 操作简便：无需细胞洗涤、沉淀收集或有机溶剂溶解，适合高通量检测；
3. 细胞毒性极低：检测后细胞形态和功能不受影响，可用于后续实验；
4. 灵敏度高：线性范围宽，结果稳定，重复性好。
【储存条件】
- 保存：2-8℃ 避光保存，有效期 12 个月。
- 运输：蓝冰或冰袋运输，收货后立即 2-8℃ 存放。
- 注意事项：避免反复冻融，反复冻融可能导致背景 OD 值升高。若需长期保存，可置于 -20℃。
【产品组成】
本品为 500 T 规格（每孔推荐加入 10 μL），单瓶约 5 mL，内含溶于无菌缓冲溶液的 WST-8 及电子耦合剂 1-Methoxy PMS。
【使用说明】
1.实验前准备
- 所需材料：酶标仪（具备 450 nm 滤光片，建议使用 600–650 nm 参比波长）、96 孔细胞培养板、CO₂ 培养箱、微量移液器。
- 建议设置 3-6 个复孔，并设置空白对照孔（含培养基和 CCK-8，不含细胞）。
2.操作步骤
（1）细胞接种：在 96 孔板中每孔加入100 μL细胞悬液（贴壁细胞约 1×10⁴ 个/孔，悬浮细胞约 2-5×10⁴ 个/孔，具体需预实验优化），置于 37℃、5% CO₂ 培养箱中预培养（贴壁细胞培养 2-4 小时至贴壁或过夜；悬浮细胞可直接进行下一步）。
（2）药物处理（可选）：向每孔加入不同浓度的待测药物，继续培养适当时间（如 6、12、24、48 小时等）。
（3）加入 CCK-8：向每孔加入10 μL CCK-8 溶液（注意避免产生气泡，气泡会影响 OD 值读数）。
> 若待测物质具有氧化性或还原性，建议在加入 CCK-8 前更换新鲜培养基。
（4）孵育显色：将培养板放回培养箱内孵育 1–4 小时（具体时间根据细胞种类和数量预实验确定，一般 0.5-4 小时均可，以对照孔 OD 值 0.5–1.5 为宜）。
（5）测定吸光度：使用酶标仪在 450 nm波长处测定各孔 OD 值。若样品浑浊，建议采用双波长检测（450 nm 检测，600–650 nm 参比）。
- 若不立即测定，可向每孔加入 10 μL 0.1 M HCl 或 1% SDS 溶液，避光室温保存，24 小时内吸光度稳定。
3.结果计算
- 空白孔（Ab）：含培养基和 CCK-8，不含细胞。
- 对照孔（Ac）：含细胞、培养基和 CCK-8，不含药物。
- 实验孔（As）：含细胞、培养基、CCK-8 和药物。
细胞存活率（%）= [(As – Ab) / (Ac – Ab)] × 100%
细胞抑制率（%） = [(Ac – As) / (Ac – Ab)] × 100%
【注意事项】
1. 仅限科研使用，不得用于临床诊断、治疗或生物制品生产。
2. 建议先进行预实验，确定最佳细胞接种密度、药物处理时间及 CCK-8 孵育时间。
3. 在 96 孔板中，贴壁细胞最小接种量至少为 1,000 个/孔（100 μL 培养基）；悬浮细胞推荐 ≥ 2,500 个/孔。
4. 酚红和血清对检测结果无明显影响，可通过扣除空白孔背景消除干扰。
5. 若待测药物在 450 nm 处有强吸收，需设置药物空白对照（含培养基、CCK-8 和药物，不含细胞）进行校正。
6. 金属离子（如 Pb²⁺、Fe²⁺、Cu²⁺ 等）可能抑制显色反应，应尽量避免。
7. 在培养箱内培养时，培养板最外一圈的孔易干燥挥发，建议只加培养基，不作为测定孔。
8. 若细胞培养时间较长导致培养基颜色发生变化，应洗涤细胞更换培养基后再加 CCK-8 检测。
9. 本试剂盒对细胞毒性极低，检测后细胞可继续用于其他实验，但建议尽快使用。
10. 废弃液及接触过的耗材按生物废弃物处理。操作时请穿着实验服并佩戴一次性手套。