产品详情
【产品简介】
Augene Tech 的细胞色素C氧化酶活性检测试剂盒（显色法），适用于动物、植物、微生物及培养细胞等样本中细胞色素C氧化酶（Cytochrome C Oxidase, COX）活性的定量检测。细胞色素C氧化酶又称线粒体呼吸链复合物IV，是线粒体电子传递链末端的核心氧化酶，负责将电子从还原型细胞色素C传递至氧气，其活性异常与多种代谢紊乱、神经退行性疾病及衰老密切相关。本试剂盒采用比色法，可简单、快速、高灵敏地检测组织、细胞及分离纯化线粒体样品的COX活性，样品用量少（可检测低至100 ng小鼠肝脏或50 ng线粒体样品）。
【产品特点】
1. 高灵敏度：样品用量少，可精准检测微量样本中的COX活性；2.
2. 经典比色法：基于550 nm吸光度下降，结果稳定可靠；
3. 适用广泛：可检测动物、植物、微生物及培养细胞等样本；
4. 操作便捷：提供完整反应体系，支持微量比色皿或96孔板检测。
【储存条件】
1. 保存：-20℃ 避光保存，有效期 12 个月。
2. 运输：冰袋或蓝冰运输，收货后立即 -20℃ 存放。
3. 注意事项：避免反复冻融；还原型细胞色素C溶液对光敏感，需避光保存。
【产品组成】
组分 | 规格 | 储存条件 |
Assay Buffer（检测缓冲液） | 适量 | -20℃ |
还原型细胞色素C（Reduced Cytochrome C） | 适量 | -20℃ 避光 |
酶稀释液（Enzyme Dilution Buffer） | 适量 | -20℃ |
具体规格及数量请以产品标签为准。
【自备材料】
可见分光光度计或酶标仪（含 550 nm 波长）；
微量玻璃比色皿或 96 孔透明平底板；
匀浆器/研钵、台式离心机、恒温水浴/培养箱、可调式移液器、蒸馏水。
【样本处理】
1.组织或细胞收集：称取约 0.1 g 组织或收集约 500 万细胞，加入适量预冷 PBS 洗涤，离心弃上清。
2.裂解：按每 100 万细胞加入 100–200 μL 裂解液的比例加入适当裂解液，吹打混匀，冰浴 5–10 分钟以充分裂解。
3.离心：4℃ 约 12,000×g 离心 3–5 分钟，取上清用于后续检测。
4.线粒体样品（可选）：如需检测分离纯化的线粒体，获得线粒体沉淀后用适当缓冲液重悬即可。
【操作步骤】
1. 仪器预热：分光光度计或酶标仪预热 30 分钟以上，调节波长至 550 nm，以蒸馏水或检测缓冲液调零。
2. 工作液配制：将还原型细胞色素C溶液按产品标签说明用 Assay Buffer 稀释，配制成 COX 检测工作液。
3. 反应体系配制（以 96 孔板或微量比色皿为例）：
试剂 | 测定孔（μL） | 背景对照孔（μL） |
检测工作液 | 200 | 200 |
待测样本 | 10 | — |
酶稀释液 | — | 10 |
4. 迅速混匀后，立即于 37℃（哺乳动物）或 25℃（其他物种）条件下启动反应。
5. 吸光度监测：立即读取初始吸光度（A1），然后连续监测 30–45 分钟 内 550 nm 处吸光度的下降值（A1 → A2）。
6. 计算：ΔA = A1（测定） - A2（测定） - [A1（背景） - A2（背景）]，根据 ΔA 及消光系数计算酶活性。
【结果计算】
COX 活性单位定义及计算公式请参考产品分析证书（COA）。建议使用样本蛋白浓度对酶活性进行归一化（需另行进行 BCA 或 Bradford 蛋白定量）。若以样本鲜重计算，需明确记录取样量。
【注意事项】
1.本产品仅供科研使用，不得用于临床诊断或治疗。
2.反应体系需严格控制在 37℃（哺乳动物）或 25℃（其他物种），温度波动会影响酶活测定。
3.建议每次实验设置背景对照孔，并先做预实验以确定最佳样本量或稀释倍数。
4.操作时请穿戴实验服并戴一次性手套。
5.实验结果受样本状态、操作手法、仪器精度等多种因素影响，相关处理只限于产品本身，不涉及其他赔偿。