产品详情
【产品简介】
Augene Tech 的晚期糖基化终末产物受体（RAGE）检测试剂盒，适用于体外定量检测小鼠血清、血浆、组织匀浆、细胞裂解液、细胞培养上清及其他生物液体中的 RAGE 含量。
RAGE 是一种模式识别受体，属于免疫球蛋白超家族，在糖尿病血管并发症、神经退行性疾病、炎症及肿瘤发生发展中发挥关键作用。本试剂盒采用双抗体夹心酶联免疫吸附法（ELISA），具有高灵敏度与宽检测范围，可用于相关疾病机制的基础研究。
【检测原理】
本试剂盒采用双抗体夹心法。将抗小鼠 RAGE 捕获抗体预包被于酶标板微孔中，加入标准品或样本后，其中的 RAGE 与固相抗体结合。洗涤后加入生物素化的检测抗体，形成“捕获抗体-抗原-检测抗体”复合物。再与 HRP 标记的亲和素结合，彻底洗涤后加入 TMB 底物显色。TMB 在过氧化物酶催化下呈蓝色，加酸终止后变为黄色。颜色深浅与样本中 RAGE 浓度呈正相关，用酶标仪在 450 nm 波长下测定 OD 值，通过标准曲线计算浓度。
【产品参数】
检测范围：31.2–2,000 pg/mL
灵敏度：最低检测限 ≤ 13.1 pg/mL
特异性：与其它相似物质无明显交叉反应
精密度：批内 CV < 10%，批间 CV < 12%
回收率：血清平均 85%，EDTA 血浆平均 88%，肝素血浆平均 85%
线性范围：样本在 1:2 至 1:16 稀释范围内线性良好
稳定性：有效期内按推荐温度保存，活性降低率 < 5%
反应时长：约 3 小时
【产品特点】
1. 高灵敏度：最低检测限 ≤ 13.1 pg/mL，可有效检测低丰度样本。
2. 宽检测范围：31.2–2,000 pg/mL，覆盖常见生物样本浓度区间。
3. 重复性好：批内与批间变异系数分别控制在 10% 与 12% 以内。
4. 样本适用性广：经验证适用于血清、血浆、组织匀浆、细胞裂解液及细胞培养上清等多种样本类型。
【储存条件】
保存：2–8℃ 避光保存，有效期见外包装标签。
运输：冰袋或蓝冰运输，收货后立即 2–8℃ 存放。
注意事项：未使用的板条应密封后 2–8℃ 保存，避免受潮。
【产品组成】
预包被 RAGE 抗体微孔板（可拆卸）：8 × 12 条
RAGE 标准品（冻干粉）：2 瓶
检测溶液 A（生物素化抗体，100×）：120 μL
检测溶液 B（HRP 标记亲和素，100×）：120 μL
检测稀释液 A（2×）：12 mL
检测稀释液 B（2×）：12 mL
TMB 底物：9 mL（避光保存）
终止液：6 mL
30× 浓缩洗涤缓冲液：20 mL
封板膜：4 张
说明书：1 份
(注：以上组分均于 2-8℃ 避光保存，具体规格及数量请以产品实物标签为准。)
【自备材料】
酶标仪（含 450 nm 波长）
37℃ 恒温箱
自动洗板机或多道移液器
精密单道及多通道移液器（使用前需校准）
无菌 EP 管、一次性吸头、去离子水、吸水纸、加样槽
【样本采集与处理】
1. 血清：全血室温放置 2 小时或 2–8℃ 过夜，1000×g 离心 20 分钟，取上清。
2. 血浆：推荐使用 EDTA 或肝素抗凝。采集后 30 分钟内于 2–8℃ 1000×g 离心 15 分钟，取上清。
3. 组织匀浆：用预冷 PBS 冲洗组织，按 1:9 重量体积比加入 PBS（含蛋白酶抑制剂）匀浆。5000×g 离心 5–10 分钟，取上清。
4. 细胞裂解液/培养上清：离心去除颗粒或细胞碎片，取澄清上清。
> 样本保存：避免反复冻融。2–8℃ 保存不超过 5 天，-20℃ 不超过 6 个月，-80℃ 不超过 2 年。
【试剂准备】
1. 平衡：实验前 20 分钟从冰箱取出试剂盒，平衡至室温（18–25℃）。
2. 洗涤液：将 30× 浓缩洗涤液用去离子水按 1:30 稀释。
3. 标准品梯度稀释：按标签说明复溶标准品，并用样本稀释液进行倍比稀释，制备标准曲线各浓度点（参考范围 31.2–2,000 pg/mL）。
4. 检测溶液 A/B：临用前按标签说明稀释配制。
【操作步骤】
1. 加样：设标准孔与样本孔。每孔加入 100 μL 标准品或待测样本。覆膜，37℃ 孵育 1 小时。
2. 加检测液 A：弃液，每孔加入 100 μL 检测溶液 A（生物素化抗体）。覆膜，37℃ 孵育 1 小时。
3. 洗板：弃液，洗板 3 次，拍干。
4. 加检测液 B：每孔加入 100 μL 检测溶液 B（HRP 标记亲和素）。覆膜，37℃ 孵育 30 分钟。
5. 洗板：弃液，洗板 5 次，拍干。
6. 显色：每孔加入 90 μL TMB 底物，37℃ 避光孵育 10–20 分钟。
7. 终止与读数：每孔加入 50 μL 终止液，立即于 450 nm 处读取 OD 值。
【结果计算】
1. 计算标准品与样本复孔的平均 OD450 值，减去空白孔 OD 值作为校正值。
2. 以标准品浓度为横坐标，OD450 值为纵坐标，采用四参数 Logistic（4-PL）曲线拟合绘制标准曲线。
3. 将样本 OD 值代入曲线方程计算浓度。若样本经过稀释，结果需乘以相应稀释倍数。
【注意事项】
1.本产品仅供科研使用，不得用于临床诊断或治疗。
2.终止液为酸性溶液，操作时请穿戴实验服、手套和护目镜，避免直接接触皮肤。
3.不同批次试剂严禁混用；加样时更换枪头以防交叉污染；洗板后及时加入下一步试剂，避免板孔干燥导致检测失效。
4.实验结果受样本状态、操作手法、仪器精度及环境条件等多种因素影响，相关售后处理仅限产品本身，不涉及其他连带赔偿。