间充质干细胞成骨诱导分化试剂盒

【产品简介】

Augene Tech 的间充质干细胞成骨诱导分化试剂盒专为体外诱导间充质干细胞（MSC）向成骨细胞分化而设计。本产品包含优化配比的成骨诱导添加剂、优质胎牛血清、基础培养基以及茜素红染色液。在体外条件下，可有效促进 MSC 向成骨细胞分化，形成钙化结节，并通过茜素红染色进行鉴定。适用于人、大鼠、小鼠等来源的骨髓、脂肪、脐带等组织间充质干细胞的成骨分化研究。

【产品特点】

1. 即用型：按比例混合即成完全培养基，无需额外添加；

2. 诱导高效：2-4周形成钙结节，茜素红染色清晰；

3. 无菌即用：0.22 μm过滤除菌；

4. 配套完整：含茜素红染色液，诱导染色一步完成。

【储存条件】

- 基础培养基：2-8℃避光，有效期12个月

- 胎牛血清、诱导添加剂：-20℃，有效期12个月

- 茜素红染色液：室温，有效期12个月

- 配制后完全培养基：2-8℃，有效期2周

【产品组成】

- 基础培养基 85 mL、胎牛血清 10 mL、诱导添加剂 5 mL、茜素红染色液 5 mL

- 完全培养基配制：基础培养基 + 血清 + 添加剂 = 85:10:5，混匀即用

【使用说明】

1. 细胞接种

- 使用第3-5代、状态良好的MSC，消化后计数。

- 推荐接种密度：6孔板约1×10⁵/孔，T25瓶约2.5×10⁵，其他器皿按底面积等比调整。培养液量以覆盖底面为准（如6孔板2 mL，T25瓶5 mL）。

- 建议培养板预先用0.1%明胶包被（37℃，30 min）。

 2. 诱导分化

- 细胞融合度达 60%-70%时，换为成骨诱导完全培养基。

- 每2-3天 更换新鲜诱导培养基。

- 诱导 2-4周，镜下观察钙结节形成。

3. 茜素红染色

- 诱导结束后，弃培养基，PBS洗涤1次。

- 加入4%多聚甲醛，室温固定20-30 min。

- 弃固定液，PBS洗涤2次。

- 加入茜素红染色液，室温染色15-30 min。

- 弃染液，PBS洗涤2次，显微镜观察拍照。

结果判定：钙盐被染成橙红色或紫红色颗粒/斑块为阳性。

【注意事项】

1. 仅限科研使用，不得用于临床诊断或治疗；

2. 严格无菌操作；

3. 换液时轻柔，避免冲击细胞层；

4. 诱导培养基使用前需37℃预热；

5. 如细胞大量漂浮，可暂时换回普通完全培养基恢复；

6. 不同来源MSC钙结节出现时间差异较大，以镜下观察为准；

7. 废液按生物废弃物处理。