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核心原理：双重SMAD抑制（Dual-SMAD Inhibition）。利用Noggin（BMP抑制剂）和SB431542（TGFβ/Activin/Nodal通路抑制剂）阻断SMAD信号通路，驱动干细胞向神经外胚层快速分化。
适用细胞：人多能干细胞（hPSCs），包括诱导多能干细胞（iPSCs）和胚胎干细胞（ESCs）。
分化周期：约 21 天即可获得高纯度的神经祖细胞（NPCs）。
储存条件：-20°C 避光保存。基础培养基通常 2-8°C 保存。
有效期：请以试剂盒外包装及随附的质检报告（COA）为准。
试剂盒组分与原理
SMADi 补充剂：包含优化的SMAD信号通路小分子抑制剂混合物，是实现高效神经诱导的核心组分。
神经诱导基础培养基：为细胞分化提供必需的营养成分。
功能机制：在人多能干细胞培养体系中加入SMAD抑制剂，可以模拟胚胎发育早期的神经诱导过程，在短时间内获得极高纯度的神经祖细胞群体，且无需通过拟胚体（EB）阶段。
实验操作流程（单层培养法）
1. 细胞准备与包被
包被基质：使用 Geltrex 等基质胶提前包被 6 孔板（37°C 孵育 1 小时）。
细胞解离：将状态良好的 iPSCs 或 ESCs 使用 Gentle Cell Dissociation Reagent 或 Accutase 在 37°C 下解离 8-10 分钟。
单细胞悬液制备：用移液器轻轻吹打 3-5 次以破碎细胞团块，离心收集细胞（300×g，5分钟）。
2. 神经诱导启动（第 0-7 天）
接种：将细胞以 2 × 10^5 细胞/cm² 的密度重悬于含有 SMADi 补充剂的神经诱导培养基中，接种至包被好的孔板内。
ROCK 抑制剂处理：在接种后的前 24 小时内，向培养基中加入 ROCK 抑制剂 Y27632（10 µM），以显著提高单细胞的存活率。
换液：从第 1 天开始，每日更换新鲜的含 SMADi 补充剂的神经诱导培养基。
3. 神经祖细胞扩增（第 7-21 天）
第一次传代（第 7 天）：使用 Accutase 消化细胞，以 2 × 10^5 细胞/cm² 的密度重新接种到新的 Geltrex 包被孔板中，继续使用含 SMADi 补充剂的神经诱导培养基。
持续培养：每日更换培养基，直至第 21 天。在此期间，细胞会逐渐形成典型的神经上皮样结构。
第二次传代（第 14 天，可选）：若细胞在第 14 天已充分扩增，可再次传代以维持最佳生长状态。
4. 神经祖细胞（NPCs）获取与鉴定（第 21 天）
收获：第 21 天时，细胞已完全分化为神经祖细胞。此时可将其传代至含有神经祖细胞维持培养基（NPC Maintenance Medium）的孔板中（接种密度约 1.25 × 10^5 细胞/cm²）。
质量鉴定：建议通过免疫荧光染色检测神经祖细胞标志物（如 SOX1 和 SOX2）的表达，以确认分化效率。
应用范围
神经发育研究：研究人类神经系统早期发育的分子机制。
疾病模型构建：作为中间细胞，进一步分化为特定亚型的神经元（如多巴胺能神经元、前脑神经元等）或胶质细胞，用于构建帕金森病、阿尔茨海默病等神经系统疾病模型。
药物筛选与毒理测试：用于评估候选药物对神经细胞的毒性或治疗效果。
️ 注意事项
细胞代数：获得的神经祖细胞（NPCs）建议使用不超过 P4 代，以免细胞分化潜能下降。
无菌操作：SMADi 补充剂及培养基对微生物污染极其敏感，请务必在超净台中进行无菌操作。
基质胶处理：包被用的基质胶（如 Geltrex）需提前在 4°C 过夜解冻，分装后保存于 -20°C，避免反复冻融。
换液频率：诱导期间必须保证每日换液，以维持小分子抑制剂的有效浓度。
本产品仅供科研使用，不可用于临床诊断、治疗或任何形式的体内人体应用。具体操作细节请以购买批次随附的官方说明书为准。