产品详情
【产品简介】
Augene Tech 的小鼠β淀粉样蛋白1-42（Aβ1-42）ELISA检测试剂盒，适用于体外定量检测小鼠血清、血浆及其他生物体液样本中天然及部分重组Aβ1-42的浓度。Aβ1-42是阿尔茨海默病（AD）发病机制中的关键分子，其异常聚集被认为是神经毒性斑块形成的重要环节。本产品仅供科研使用，不用于临床诊断或治疗。
【检测原理】
本试剂盒采用双抗体夹心法酶联免疫吸附试验（ELISA）。用抗小鼠Aβ1-42抗体预包被于酶标板上，加入标准品或样品后，其中的Aβ1-42与固相抗体结合，游离成分被洗去。随后依次加入生物素化的抗小鼠Aβ1-42检测抗体和辣根过氧化物酶（HRP）标记的亲和素，形成“捕获抗体-抗原-检测抗体-酶”免疫复合物，游离成分再次被洗去。加入TMB底物后，含Aβ1-42的孔呈现蓝色，加入终止液后变为黄色。用酶标仪在450 nm（±2 nm）波长下测定OD值，Aβ1-42浓度与OD值呈正比，通过标准曲线计算样本浓度。
【产品特点】
高灵敏度：最低检测限可达 1.88 pg/mL；
宽检测范围：3.13–200 pg/mL；
精密度好：板内、板间变异系数均 < 10%；
特异性强：可特异性识别小鼠Aβ1-42，与其它类似物无明显交叉反应；
样本量少：仅需 100 μL 样本。
【储存条件】
保存：2–8℃ 保存，有效期 12 个月。未开封试剂盒可在 2–8℃ 稳定保存 1 个月；若 1 个月内不使用，收到后请按说明书中的储存表分别保存各组分。
运输：冰袋或蓝冰运输，收货后立即 2–8℃ 存放。
【产品组成】（48 T 规格参考）
名称 | 规格 | 备注 |
|---|---|---|
预包被酶标板（可拆卸） | 8 孔 × 6 条 | — |
标准品（冻干粉） | 2 支 | 复溶后用于制备标准曲线 |
100× 生物素化抗体 | 1 支 | 使用前稀释 |
100× SA-HRP（链霉亲和素-HRP） | 1 支 | 使用前稀释 |
20× 浓缩洗涤液/稀释液 | 1 瓶 | 使用前用蒸馏水稀释 |
显色液 A / 显色液 B | 适量 | 避光保存 |
终止液 | 适量 | 稀硫酸溶液 |
封板膜 | 4 张 | — |
具体规格及数量请以产品标签为准。
【自备材料】
酶标仪（含 450 nm 波长，600–680 nm 校正波长更佳）；
移液器及一次性枪头；
蒸馏水或去离子水；
量筒、洗瓶、排枪或自动微孔板清洗机；
水平轨道微孔板振荡器（500 ± 50 rpm）；
用于稀释标准品和样品的离心管。
【样本采集与处理】
1. 血清
使用血清分离管，室温凝结 30 分钟，1000×g 离心 15 分钟，立即取出血清检测或分装冻存于 ≤ -20℃。避免反复冻融。
2. 血浆
使用 EDTA 或肝素抗凝，收集后 30 分钟内于 2–8℃ 1000×g 离心 15 分钟，取上清检测或分装冻存于 ≤ -20℃。避免反复冻融。（注：柠檬酸盐抗凝血浆未经验证；溶血样本不适用。）
3. 细胞培养上清
1000×g 离心 15 分钟去除颗粒，立即检测或分装冻存于 -20℃。
4. 组织匀浆
用预冷 PBS（0.01 M, pH 7.4）冲洗组织，按 1:9 重量体积比加入含蛋白酶抑制剂的 PBS 匀浆，5000×g 离心 5–10 分钟，取上清检测。
样本外观：应清澈透明，悬浮物应离心去除。标本溶血会影响检测结果，不宜使用。
【试剂准备】
使用前平衡：将所有试剂和板条置于室温平衡 20 分钟以上。
洗涤液/稀释液（1×） ：若有晶体析出，37℃ 加热至完全溶解。用蒸馏水按 1:20（或按标签比例）稀释。
标准品梯度：将标准品按标签说明复溶后，用 1× 稀释液进行倍比稀释，制备标准曲线各浓度点（参考范围 3.13–200 pg/mL）。
抗体工作液：使用前将 100× 生物素化抗体离心，用 1× 稀释液稀释成 1× 工作液，当日配制当日使用。
酶结合物工作液：使用前将 100× SA-HRP 离心，用 1× 稀释液稀释成 1× 工作液。
【操作步骤】
加样：每孔加入 100 μL 标准品或待测样本。盖上封板膜，37℃ 孵育 90 分钟。
洗板：弃去液体，每孔加满洗涤液，静置 30 秒后弃去，重复洗板 3 次，拍干。
加检测抗体：每孔加入 100 μL 生物素化抗体工作液。盖上封板膜，37℃ 孵育 60 分钟。洗板 3 次。
加酶：每孔加入 100 μL SA-HRP 工作液。盖上封板膜，37℃ 孵育 30 分钟。洗板 5 次。
显色：每孔加入 90 μL TMB 底物（或按标签说明加入显色液 A/B），37℃ 避光孵育 15 分钟。
终止与测定：每孔加入 50 μL 终止液，轻轻混匀，5 分钟内于 450 nm 处读取 OD 值。
【结果计算】
计算标准品和样本复孔的平均 OD 值，减去空白孔 OD 值作为校正值。
以浓度为横坐标，OD 值为纵坐标，绘制四参数逻辑（4-P）标准曲线。
根据样本 OD 值在曲线上查出对应浓度，乘以样本稀释倍数即为实际浓度。若 OD 值超出标准曲线上限，应适当稀释后重测。
【注意事项】
仅限科研：本产品仅供科研使用，不得用于临床诊断或治疗。
安全防护：终止液为稀硫酸（具腐蚀性），显色液 B 具刺激性，操作时请穿戴实验服、手套和口罩。
防交叉污染：加样必须更换枪头，试剂使用独立容器，混合蛋白溶液时避免起泡。
规范加样与孵育：确保试剂连续加入孔中，孵育时务必贴紧封板膜，推荐使用恒温箱以保证温度波动在 1℃ 以内。
洗板技巧：自动洗板机洗涤时，建议加入洗液后浸泡 30 秒，或在步骤间将板旋转 180°以提高精度。
显色与终止：显色剂需避光且加入前应保持无色；加入终止液后孔内颜色应从蓝色变为黄色（若呈绿色说明未混匀）。
抗凝剂选择：推荐使用 EDTA 作为血浆抗凝剂，尽量避免肝素（过量肝素可能导致结果偏高，若使用需确保浓度 < 10 IU/mL）。
结果差异：实验员手法、移液/洗涤技术、温度及试剂批次等变化均可能导致结果差异，请严格按说明书规范操作。