产品详情
【产品简介】
Augene Tech 的血红素（Heme）检测试剂盒，适用于体外定量检测血清、血浆（如黄疸或溶血血液样本）、红细胞裂解液以及其他含有血红素（Heme）的样品。
血红素是血红蛋白的一种非蛋白质铁卟啉成分，也存在于其他呼吸色素及动植物细胞中。作为血红蛋白和多种氧化还原酶的辅基，血红素参与机体的氧转移和氧化还原过程。脂溶性非偶联胆红素在肝细胞内转化为水溶性偶联胆红素。当红细胞受损、肝负荷增加或排泄障碍时，血液中胆红素浓度升高可导致黄疸。本产品采用酶催化法，可快速、准确地定量样本中的 Heme 含量。
【检测原理】
本试剂盒基于酶催化法。活化的 Heme 可以将 TMB 底物氧化为蓝色溶液（最大吸收峰 630 nm）。试剂盒中提供 Heme 标准品和活化稀释液。将活化后的标准品、稀释后的样品与 TMB 底物溶液依次加入孔中进行显色反应。随后加入硫酸终止液停止反应，颜色变为黄色。通过分光光度法在 450 nm 处测量 OD 值。使用曲线拟合软件，将样品的 OD450 值与标准曲线比对，即可计算样品中 Heme 的浓度。
【产品参数】
项目 | 规格 |
适用种属 | 通用（Universal） |
实验方法 | 酶催化法 |
检测范围 | 15.6 – 1000 pmol/mL |
灵敏度 | 5 pmol/mL |
检测时长 | 20 分钟（不含平衡和样品准备时间） |
单孔样品最大用量 | 血清/血浆：3 μL；细胞培养上清/裂解液：100 μL；其他液体：50 μL |
特异性 | 特异性结合 Heme，与其它类似物无明显交叉反应 |
储存条件 | 2–8℃（严禁冻存），有效期见盒面标签 |
【产品特点】
1. 快速高效：仅需 20 分钟即可完成酶促显色反应；
2. 高灵敏度：最低检测限达 5 pmol/mL；
3. 宽检测范围：15.6–1000 pmol/mL，涵盖大部分生物样本浓度；
4. 样本用量少：血清/血浆样本仅需 3 μL。
【储存条件】
- 保存：未启封试剂盒于 2–8℃ 保存，严禁冻存。
- 运输：冰袋或蓝冰运输，收货后立即 2–8℃ 存放。
【产品组成】
组件名称 | 96T规格 | 储存条件 |
反应微孔板（ELISA Microplate） | 8×12条 | 室温 |
10×Heme标准品（10 nmol/mL） | 120 μL | 2-8℃ |
活化稀释液（Activation diluent buffer） | 20 mL | 2-8℃ |
显色底物（TMB Substrate） | 10 mL | 2-8℃（避光） |
终止液（Stop Solution） | 10 mL | 2-8℃ |
封板贴（Plate Sealer） | 5张 | 室温 |
说明书（Product Description） | 1份 | 室温 |
> 注：试剂瓶内提供的液体体积比标签标明的稍多，请使用移液器精确量取。
【自备材料】
1. 酶标仪（波长 450 nm 滤光片，可选配 570 nm 或 630 nm 校正波长）；
2. 37℃ 恒温箱（不推荐使用细胞用 CO₂ 培养箱）；
3. 自动洗板机或多道移液器/5 mL 滴管（手工洗板用）；
4. 精密单道（0.5–10 μL, 5–50 μL, 20–200 μL, 200–1000 μL）及多通道移液器（使用前需校准）；
5. 无菌 EP 管及一次性吸头、吸水纸及加样槽、去离子水或蒸馏水。
【样本采集与处理】
1. 血清：全血室温放置 2 小时或 2–8℃ 过夜。1000×g 离心 20 分钟，取上清。可立即检测或分装冻存于 -20℃ 或 -80℃。
2. 血浆：推荐使用 EDTA-Na₂/K₂ 抗凝。采集后 30 分钟内于 2–8℃，1000×g 离心 15 分钟，取上清。可立即检测或分装冻存。
3. 组织样本：预冷生理盐水洗涤去除残留血液，称重。按 1g 组织 : 9mL 生理盐水（建议加 1mM PMSF）于冰上匀浆，可超声或反复冻融。5000×g 离心 5 分钟，取上清。
4. 细胞培养上清：2–8℃，2500 rpm 离心 5 分钟，收集澄清上清。
5. 细胞裂解液：收集并清洗细胞，加入 0.5–1 mL 生理盐水（含 1mM PMSF），冰上超声破碎。2–8℃，10000 rpm 离心 10 分钟，取上清。
> 样本注意事项：避免使用溶血、高血脂样品。样品在 2–8℃ 保存应小于 5 天，-20℃ 不应超过 6 个月，-80℃ 不应超过 2 年。冻存标本融化时，应采用 15–25℃ 水浴快速融化。
【推荐稀释方案】
血清/血浆中的基质成分会影响检测结果，需用样品稀释液至少稀释 2倍 (1/2)。
* 人血浆/血清：1/100 – 1/200
* 大鼠/小鼠血清：1/100 – 1/400
* 小鼠全血：1/10000 – 1/400000
(具体稀释方法：如稀释 100 倍，取 3 μL 样品 + 177 μL 生理盐水加入 120 μL 样品稀释液中，轻轻混匀。)
【试剂准备】
1. 平衡：提前 20 分钟从冰箱取出试剂盒，平衡到室温（18–25℃）。
2. 标准品梯度稀释：
* Zero tube (1000 pmol/mL)：取 450 μL 活化稀释液加入 EP 管，再加入 50 μL 10× Heme 标准品，充分混匀。
* 梯度稀释：取 7 个 EP 管，分别加入 0.3 mL 活化稀释液（或样品稀释液），依次取 0.3 mL 上一步标准品进行倍比稀释，浓度依次为：1000, 500, 250, 125, 62.5, 31.25, 15.625, 0 pmol/mL。
* 注意：已溶解的 Zero tube 标准品请保存于 2–8℃，12 小时内使用；其他梯度稀释液请于 2 小时内使用。
【操作步骤】
1. 加样：设标准孔、样本孔、空白孔。向相应孔中加入 100 μL 标准品或待测样品（建议做复孔）。
2. 加 TMB：每孔加入 100 μL TMB 底物溶液，覆膜，在 37℃ 暗箱中孵育 20 分钟。（注：加样前请先将 TMB 底物平衡至 37℃）。
3. 终止：每孔加入 50 μL 终止液。颜色立即由蓝变黄，终止液添加顺序应与 TMB 添加顺序相同。
4. 读数：立即用酶标仪在 450 nm 处读取 OD 值（如有 570 nm 或 630 nm 校正波长，请用 OD450 减去校正值）。
【结果计算】
1. 计算标准品和样品复孔的平均 OD450 值，减去空白孔的 OD450 值作为计算值。
2. 以浓度为横坐标，OD450 值为纵坐标，使用四参数方程（4PL）绘制标准曲线。
3. 将样本 OD 值代入曲线方程计算浓度，若样品被稀释过，需乘以相应的稀释倍数。
【注意事项】
1. 仅限科研使用，不用于临床诊断。
2. 需使用无菌一次性吸头，不同批次试剂严禁混用；加样完成需贴覆膜以防蒸发；手工洗板时吸头切勿触及孔底。
3. 洗板后需及时加入下一步试剂，防止板孔干燥导致检测失效。
4. 终止液为酸性溶液，操作时请穿实验服、戴口罩和手套。检测血液或体液样本时，请严格遵守生物实验室安全防护条例。
5. 最终实验结果与试剂有效性、操作者手法及环境密切相关。