产品详情
【产品简介】
Augene Tech 的线粒体呼吸链复合物III活性检测试剂盒，适用于动物、植物、微生物及培养细胞等样本中线粒体呼吸链复合物III（CoQ-细胞色素C还原酶）活性的定量检测。线粒体呼吸链复合物III（Mitochondrial Complex III），又称细胞色素C还原酶（Cytochrome C Reductase）或辅酶Q-细胞色素C还原酶（Coenzyme Q-Cytochrome c Reductase），是线粒体电子传递链的核心成分。它负责将还原型辅酶Q（CoQH₂）的氢传递至氧化型细胞色素C，生成还原型细胞色素C。复合物III活性异常与糖尿病、癌症、帕金森病、衰老及多种代谢性疾病密切相关。本试剂盒采用分光光度法，可简单、快速、高灵敏地检测组织、细胞以及分离纯化线粒体样品的复合物III活性。
【产品特点】
1.高灵敏度：检测灵敏度高，样品用量少；
2.适用广泛：可检测动物、植物、微生物及培养细胞等样本；
3.结果可靠：基于细胞色素C还原的经典比色法，结果稳定；
【储存条件】
1.未开封试剂盒：-20℃ 避光保存，有效期 6个月。其中细胞色素C及底物须避光保存。
2.运输：冰袋或蓝冰运输，收货后立即按各组分要求存放。
3.注意事项：已配制的工作液于-20℃可保存 2周，避免反复冻融。
【产品组成】
组分 | 规格 | 储存条件 |
提取液 | 80 mL | 4℃ |
试剂一（工作液底物） | 10 mL × 2瓶 | 4℃ |
试剂二（粉剂） | 2支 | -20℃ |
试剂三（细胞色素C等） | 1.5 mL | 4℃ 避光 |
工作液配制：临用前将1支试剂二加入1瓶试剂一中充分溶解，未用完的-20℃分装保存2周。
【自备材料】
可见分光光度计或酶标仪（含550 nm波长）；
微量玻璃比色皿或96孔板（非聚苯乙烯材质，推荐石英板）；
匀浆器/研钵、台式离心机、恒温水浴/培养箱、可调式移液器、蒸馏水。
【样本处理】
1. 组织或细胞收集：称取约 0.1 g 组织或收集 500万细胞，加入 1 mL 提取液，冰浴匀浆。
2.初步离心：4℃ 600×g 离心10分钟，留上清。
3.线粒体沉淀：将上清移至新管，4℃ 11000×g 离心15分钟，弃上清（上清为胞浆提取物，可选做泄漏酶活检测）。
4.线粒体裂解：向沉淀中加入 200 μL 提取液，冰浴超声破碎（功率20%，超声5秒，间隔10秒，重复15次），即为待测酶液。
【操作步骤】
1.仪器预热：分光光度计或酶标仪预热30分钟以上，调节波长至 550 nm，蒸馏水调零。
2.反应体系配制（以96孔板或微量比色皿为例）：
试剂 | 测定组（μL） | 对照组（μL） |
工作液 | 200 | 200 |
待测样本 | 10 | 10 |
复合物IV抑制剂（自备） | 适量 | — |
加入样本后立即混匀，于 37℃（哺乳动物）或25℃（其他物种） 条件下启动反应。
3.吸光度监测：迅速读取初始吸光度（A1），准确反应 2分钟 后再次读取吸光度（A2）。
4.计算：ΔA = A2 - A1。根据ΔA及标准曲线或消光系数计算酶活性。
【结果计算】
复合物III活性单位定义及计算公式请参考产品分析证书（COA）。建议使用样本蛋白浓度对酶活性进行归一化。若用样本鲜重计算，需将胞浆提取物与线粒体沉淀的酶活相加得到总酶活。
【注意事项】
1. 本产品仅供科研使用，不得用于临床诊断或治疗。
2.反应体系需严格控制在37℃（哺乳动物）或25℃（其他物种），温度波动会显著影响酶活性测定。
3.若测定孔吸光度大于 1.0，建议将样本用提取液稀释后重新测定，计算时乘以稀释倍数。
4.提取液本身含有蛋白（约1 mg/mL），测定样本蛋白浓度时需扣除提取液的本底蛋白含量。
5.正式测定前建议取2-3个预期差异较大的样本做预实验，以确定最佳稀释倍数或样本量。
6.加样时更换枪头，试剂使用独立容器。
操作时请穿戴实验服、手套和护目镜，避免接触皮肤和眼睛。