产品详情
【产品简介】
Augene Tech 的人神经酰胺（Ceramide, CER）ELISA 检测试剂盒，适用于体外定量检测血清、血浆、组织匀浆、细胞培养上清及其他生物液体样本中人神经酰胺的含量。神经酰胺是鞘脂代谢的核心分子，作为细胞膜的重要组成成分，参与调控细胞凋亡、增殖、分化及应激反应等多种生理病理过程，其水平变化与代谢综合征、动脉粥样硬化、神经退行性疾病及肿瘤等密切相关。本产品仅供科研使用，不用于临床诊断。
【检测原理】
本试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验（ELISA）。往预先包被人神经酰胺捕获抗体的包被微孔中，依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体，经过温育并彻底洗涤。用底物TMB显色，TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的人神经酰胺呈正相关。用酶标仪在450 nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品浓度。
【产品特点】
高灵敏度：可检测低至 1.0 ng/mL 的神经酰胺；
高特异性：与类似物无明显交叉反应；
精密度好：板内、板间变异系数均 < 10%；
操作简便：双抗体一步夹心法，流程标准化，适合常规实验室操作；
应用广泛：适用于血清、血浆、组织匀浆、细胞培养上清等多种样本类型。
【储存条件】
保存：2–8℃ 避光保存，有效期 12个月。
运输：冰袋或蓝冰运输，收货后立即 2–8℃ 存放。
注意事项：
试剂盒从冷藏环境中取出后，应在室温平衡 20 分钟后方可使用；
从冰箱取出的浓缩洗涤液如有结晶，属正常现象，水浴加热使结晶完全溶解后再使用；
实验中不用的板条应立即放回自封袋中，密封（低温干燥）保存。
【产品组成】
组分 | 96 T 规格 | 备注 |
|---|---|---|
微孔酶标板 | 12孔×8条 | 预包被人神经酰胺捕获抗体 |
标准品（S0-S5） | 0.3 mL×6管 | 浓度依次为 0、12.5、25、50、100、200 ng/mL |
样本稀释液 | 6 mL | — |
检测抗体-HRP | 10 mL | — |
20×洗涤缓冲液 | 25 mL | 按说明书稀释 |
底物A | 6 mL | — |
底物B | 6 mL | — |
终止液 | 6 mL | 稀硫酸 |
封板膜 | 2张 | — |
说明书 | 1份 | — |
自封袋 | 1个 | — |
具体组分及数量请以产品标签为准。
【样本采集与处理】
1. 血清
将收集于血清分离管的全血标本在室温放置 2 小时或 4℃ 过夜，然后 1000×g 离心 20 分钟，取上清即可。可将上清置于 -20℃ 或 -80℃ 保存，但应避免反复冻融。
2. 血浆
用 EDTA 或肝素作为抗凝剂采集标本，并将标本在采集后的 30 分钟内于 2–8℃ 1000×g 离心 15 分钟，取上清即可检测。可将上清置于 -20℃ 或 -80℃ 保存，但应避免反复冻融。
3. 组织匀浆
用预冷的 PBS（0.01 M, pH 7.4）冲洗组织，去除残留血液，称重后将组织剪碎。将剪碎的组织与对应体积的 PBS（一般按 1:9 的重量体积比）加入玻璃匀浆器中，于冰上充分研磨。为了进一步裂解组织细胞，可以对匀浆液进行超声破碎或反复冻融。最后将匀浆液于 5000×g 离心 5–10 分钟，取上清检测。
4. 细胞培养物上清
请 1000×g 离心 20 分钟，取上清即可检测。
注：标本溶血会影响最后检测结果，因此溶血标本不宜进行此项检测。
【使用说明】
一、试剂准备
1× 洗涤缓冲液配制：将 20× 浓缩洗涤液用蒸馏水按 1:20 稀释（如 10 mL 浓缩洗涤液加入 190 mL 蒸馏水），混匀。
1× 通用稀释液配制：用蒸馏水将 20× 浓缩通用稀释液按 1:20 稀释，混匀。
1× 酶标抗体工作液配制：用 1× 通用稀释液将 100× 酶标抗体按 1:100 稀释（如 10 μL 酶标抗体加入 990 μL 1× 通用稀释液），混匀。配制好的工作液可在 2–8℃ 保存 8 小时。
二、标准品稀释
校准品开封前应离心 30 秒，确保所有校准品集中于底部。将 10× 校准品按需吸取一定量用 1× 通用稀释液稀释 10 倍配制成 S1（如 50 μL 10× 校准品 + 450 μL 1× 通用稀释液，得到 500 μL S1）。
三、操作步骤
加样：设置标准品孔和样本孔。标准品孔各加不同浓度的标准品 50 μL；样本孔先加待测样本 10 μL，再加样本稀释液 40 μL；空白孔不加。
温育：用封板膜封板，37℃ 温育 30 分钟。
洗涤：弃去液体，每孔加满洗涤液，静置 1 分钟后甩尽，重复 5 次，拍干。
加酶标抗体：每孔加入 100 μL 1× 酶标抗体工作液。
温育：37℃ 温育 30 分钟。
洗涤：同步骤 3，重复 5 次。
显色：每孔加入底物 A 50 μL，再加入底物 B 50 μL，轻轻振荡混匀，37℃ 避光孵育 15 分钟。
终止：每孔加入终止液 50 μL，终止反应（蓝色立即转为黄色）。
测定：以空白孔调零，在 450 nm 波长处依序测量各孔的吸光度（OD 值）。测定应在加终止液后 15 分钟内完成。
四、结果计算
以标准品浓度为横坐标，OD 值为纵坐标，绘制标准曲线（推荐使用四参数Logistic曲线拟合或线性回归）。根据样品的 OD 值，在标准曲线上查得对应浓度。按照说明书操作时样本已经稀释 5 倍，最终结果乘以 5 才是样本实际浓度。
【注意事项】
仅限科研使用，不得用于临床诊断或治疗。
试剂盒各组分应在有效期内使用，不同批号试剂请勿混用。
严格按照说明书中标明的时间、加液量及顺序进行温育操作。
所有液体组分使用前充分摇匀。
TMB 显色剂为光敏物质，操作时需避光。
终止液含稀硫酸，操作时请戴手套和护目镜，避免接触皮肤。
洗涤过程中应确保每次拍干，残留洗涤液会影响检测精度。
待测样品若超出标准曲线检测范围，应适当稀释后重新测定。
为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。