产品详情
产品简介与原理
产品简介：人生长分化因子15（GDF15）属于转化生长因子-β（TGF-β）超家族成员，是一种重要的细胞应激反应蛋白。它在调控能量代谢平衡、炎症反应、肿瘤发生发展以及心血管疾病中发挥关键作用。本试剂盒适用于体外定量检测人血清、血浆、细胞培养上清及其他相关生物液体样本中GDF15的浓度。
检测原理：本试剂盒采用经典的双抗体夹心ELISA法。酶标板上预包被有高亲和力的抗人GDF15抗体。实验时，样本中的GDF15与包被抗体特异性结合；随后加入生物素标记的抗人GDF15检测抗体，形成“包被抗体-GDF15-生物素化检测抗体”免疫复合物；再加入辣根过氧化物酶（HRP）标记的链霉亲和素。经过TMB底物显色后，溶液呈蓝色，加入终止液后变为黄色。颜色的深浅与样本中GDF15的浓度呈正相关。使用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过绘制标准曲线计算样本浓度。
实验前准备与样本处理
试剂准备：实验前将所有试剂和样本平衡至室温（20-25℃）。浓缩洗涤液若在低温下析出结晶，需水浴加热助溶。
血清样本：使用无菌采血管收集血液，室温静置30分钟使血液凝固，随后在2000×g离心15分钟，小心吸取上层血清进行检测。避免使用严重溶血的样本。
血浆样本：使用EDTA或肝素作为抗凝剂采集血液，在采集后30分钟内于2-8℃、1000×g离心15分钟，吸取上层血浆进行检测。
细胞培养上清：收集细胞培养上清液，使用0.22μm滤膜过滤以去除杂质，或于1000×g离心10分钟去除沉淀后检测。
组织匀浆：用预冷的PBS冲洗组织去除残留血液，称重后按1:9的比例加入PBS进行匀浆，随后离心取上清检测。
操作步骤
1. 加样：设立标准品孔和样本孔。标准品孔加入不同浓度的标准品50μL（或按说明书特定体积）及稀释液；样本孔先加入样本稀释液，再加入待测样本（通常10-50μL）。
2. 孵育：用封板膜封住板孔，置于37℃恒温箱中孵育60-90分钟（具体时间视不同品牌试剂盒而定）。
3. 洗板：弃去孔内液体，每孔加满洗涤液，静置30-60秒后弃去，重复洗板3-5次。最后一次需在吸水纸上拍干，确保无残留液体。
4. 加酶：除空白孔外，每孔加入HRP标记的检测抗体工作液（或生物素化抗体及HRP-链霉亲和素），37℃孵育30-60分钟。
5. 洗板：重复上述洗板步骤3-5次，拍干。
6. 显色：每孔加入TMB底物显色液，37℃避光孵育15-20分钟。观察标准品孔出现明显蓝色梯度即可。
7. 终止与读数：每孔加入终止液，溶液由蓝色变为黄色。在加终止液后15分钟内，使用酶标仪在450nm波长下测定各孔OD值。
预期结果与质量控制
结果计算：以标准品浓度为横坐标，对应的OD值为纵坐标，绘制标准曲线（推荐使用四参数拟合曲线）。根据样本的OD值在标准曲线上查出对应的GDF15浓度，若样本经过稀释，需乘以相应的稀释倍数。
预期范围：正常人血清/血浆中GDF15浓度因个体差异较大，通常在几十至几百 pg/mL 不等。在病理状态（如心衰、肿瘤）下，GDF15水平会显著升高。
质量控制：标准曲线相关系数（R²）应≥0.99；板内和板间变异系数（CV）应<10%；样本回收率应在80%-120%之间。
注意事项与故障排查
操作注意：不同批次的试剂盒组分不可混用；底物显色液对光敏感，应避免长时间暴露在强光下；洗板不充分是导致背景值过高的常见原因，建议使用洗板机或严格按照手动洗板流程操作。
标准曲线不佳：可能因标准品溶解不充分或稀释错误导致。解决：标准品需充分震荡混匀，严格按照梯度稀释操作。
背景值过高：可能因洗板不彻底或底物被污染。解决：增加洗板次数，确保孔内无残留液体；更换新鲜的底物显色液。
OD值偏低：可能因孵育时间不足或试剂未平衡至室温。解决：严格控制孵育时间和温度，实验前确保所有试剂充分回温。
样本浓度超出范围：若样本OD值高于最高标准品，需用样本稀释液对样本进行适当稀释后重新检测；若低于最低标准品，建议直接检测或使用高灵敏度试剂盒。
本产品仅用于科学研究，不可用于临床诊断或治疗。因操作不当导致的实验失败，Augene Tech不承担相应责任。实际使用时请以包装盒内附带的最新版纸质说明书为准。