产品详情
产品名称： Human Neutrophil Isolation Kit
品牌： AugeneTech
货号：AGCC-12106
规格：100次
储存条件： 15-25°C 避光保存（切勿冷冻）
有效期： 12 个月
1. 产品简介
AugeneTech 人中性粒细胞分离试剂盒是一种基于密度梯度离心原理的无菌溶液，专门用于从人新鲜抗凝全血或白细胞层（Bufy Coat） 中快速、高效地分离高纯度的中性粒细胞。该试剂盒分离出的中性粒细胞活性高、功能完整，适用于流式细胞术、细胞培养、功能分析（如吞噬实验、NETs 形成实验）及分子生物学研究。
2. 试剂盒组分
中性粒细胞分离液 100 mL 500 mL 无菌、低内毒素密度梯度溶液
红细胞裂解液 100 mL 500 mL 用于去除残留的红细胞（可选）
洗涤缓冲液 100 mL 500 mL PBS 缓冲液，含 EDTA 和 BSA
3. 实验前准备
• 样本要求： 使用新鲜采集的人外周血（采集后 6 小时内为佳）。
• 抗凝剂： 推荐使用肝素钠、肝素锂或 EDTA 抗凝管。不建议使用柠檬酸钠，因其可能引起细胞聚集。
• 试剂平衡： 请将分离液和全血样本平衡至室温（18-25°C）。 低温会降低分离效果。
• 离心准备： 确保离心机已预热至室温，并将刹车（Brake）调至关闭或最低档。
4. 操作步骤（以 10mL 体系为例）
步骤一：样本稀释
1. 将抗凝全血与无菌 PBS 或生理盐水按 1:1 比例混合稀释。
2. 轻轻颠倒混匀。
步骤二：加样（关键步骤）
1. 取一支 15mL 离心管，加入3 mL AugeneTech 中性粒细胞分离液。
2. 将稀释后的血液样本（约 3-4 mL） 缓慢地、小心地沿管壁叠加在分离液液面上。
3. 注意： 务必保持两液面清晰， 切勿将血液直接冲入分离液中，否则会破坏界面。
步骤三：离心
1. 将离心管放入离心机。
2. 设置参数：400-500 × g，室温，离心 30-35 分钟。
3. 重要： 离心结束时， 必须关闭刹车，让转子自然停止，以免扰动分层。
步骤四：细胞收集
离心后，管内液体将分为四层（从上至下）： 1. 血浆层（含血小板） 2. 环状乳白色层（PBMCs：淋巴细胞和单核细胞） 3. 分离液层 4. 沉淀层（粒细胞和红细胞）
操作： 1. 小心吸去上层血浆和中间的 PBMCs 层（如果不弃去，会污染粒细胞）。 2. 将底部的粒细胞沉淀重悬。
步骤五：红细胞去除（可选但推荐）
由于沉淀层中仍含有红细胞，建议进行红细胞裂解： 1. 加入 1-2 倍体积的 红细胞裂解液。 2.室温孵育 2-5 分钟（视红细胞量而定，显微镜下观察至红细胞消失）。 3. 加入 PBS 终止裂解， 300 × g 离心 5-10 分钟。 4. 弃上清，用洗涤缓冲液重悬沉淀。
步骤六：计数与得率
使用台盼蓝染色法进行细胞计数和活性检测。
5. 预期结果
• 纯度： 通常 >95%
• 存活率： 通常 >95%
• 得率： 取决于供体差异，通常为 2-5 × 10‘ 个细胞/mL 全血。
6. 注意事项
• 无菌操作： 整个过程应在超净台中进行。
• 温度控制： 分离液和血液必须在室温下操作，温度过低会导致粒细胞聚集在单核细胞层，降低纯度。
• 离心刹车： 离心结束时严禁使用刹车，否则会将分离好的细胞重新混合。
• 血小板污染： 如果下游实验对血小板敏感，建议在收集粒细胞沉淀前，先以 200 × g 离心10 分钟去除大部分血小板。
7. 常见问题排查
细胞得率低 原因：血液放置时间过长 解决：使用采集 6 小时内的新鲜血液
红细胞污染严重 原因：裂解时间不足或裂解液失效 解决：延长裂解时间或更换新鲜裂解液
PBMCs 污染 原因：加样时界面破坏 解决：加样时动作要极其轻柔
细胞聚团 原因：样本中 DNA 释放过多 解决：在稀释液中加入 DNase I
质量控制
• 内毒素： <0.1 EU/mL
• 无菌： 通过 0.22μm 滤膜过滤除菌
• pH 值： 7.2-7.4
免责声明： 本产品仅用于科学研究，不可用于临床诊断或治疗。AugeneTech 不对因操作不当导致的实验失败负责。
注：此说明书为通用模板，实际使用时请以包装盒内附带的最新版纸质说明书为准。
生产商： AugeneTech Co., Ltd.
发布日期： 2024 年