产品详情
【产品简介】
Augene Tech RIPA裂解液（强）是一款传统的细胞组织快速裂解液。本产品裂解得到的蛋白样品可以用于常规的PAGE、Western Blot、免疫沉淀（Immunol Precipitation，IP）、ELISA等操作，能够高效地提取细胞总蛋白，主要包括细胞质、细胞膜、细胞核、核基质、线粒体、内质网、高尔基体等蛋白。
【产品特点】
1.提取性强：以高效提取多种蛋白，适用于多种类型的样品；含有多种抑制剂，可抑制蛋白降解
2.通用性强：适用于常规的PAGE、Western Blot、IP和ELISA等多种实验
【储存条件】
-25~-15℃存储，保质期12个月，避免反复冻融。
【产品组成】
裂解液（强） 100ml
【使用说明】
细胞样品：
1.融解RIPA裂解液，混匀。取适当量的裂解液，在使用前数分钟内加入PMSF，使PMSF的最终浓度为1mM，或者根据实验需要加入适当的上述蛋白酶磷酸酶抑制剂混合物。
A.对于贴壁细胞：去除培养液，用PBS、生理盐水或无血清培养液洗一遍(如果血清中的蛋白没有干扰，可以不洗)；按照6孔板每孔加入150-250微升裂解液的比例加入裂解液；用枪吹打数下，使裂解液和细胞充分接触；通常裂解液接触动物细胞1-2秒后，细胞就会被裂解。注：植物细胞宜在冰上裂解2-10min。
B.对于悬浮细胞：离心收集细胞，轻轻漩涡振荡或者弹击管底以把细胞尽量分散开；按照6孔板每孔细胞加入150-250微升裂解液的比例加入裂解液；轻弹管底以充分裂解细胞；充分裂解后应没有明显的细胞沉淀。注：如果细胞量较多，必需分装成50-100万细胞/管，然后再裂解。
C.对于细菌或酵母：对于1mL菌液或酵母液，离心去上清，如果有必要可以使用PBS洗涤一次，充分去除液体后， 轻轻漩涡振荡或者弹击管底以把细菌或酵母尽量弹散。加入100~200μL裂解液，轻轻漩涡振荡或者弹击管底以混匀，冰上 裂解2~10min。如果希望获得更好的裂解效果，细菌和酵母可以分别使用溶菌酶和破壁酶（Lyticase）消化，然后再使用本裂解液进行裂解。
裂解液用量：通常6孔板每孔细胞或者1ml的菌液或酵母液中的细菌和酵母量加入150微升裂解液已经足够，但如果细胞密度非常高可以适当加大裂解液的用量到200微升或250微升。每100万动物细胞用100微升本产品裂解后获得的上清，其蛋白浓度约为2-4mg/ml，不同细胞有所不同。
注：充分裂解后，10000-14000g离心3-5分钟，取上清，即可进行后续的PAGE、Western和免疫沉淀等操作。
组织样品：
1.融解RIPA裂解液，混匀。取适当量的裂解液，在使用前数分钟内加入PMSF，使PMSF的最终浓度为1mM，或者根据实验需要加入适当的上述蛋白酶磷酸酶抑制剂混合物。
A.把组织剪切成细小的碎片。
B.按照每20毫克组织加入150-250微升裂解液的比例加入裂解液。(如果裂解不充分可以适当添加更多的裂解液，如果需要高浓度的蛋白样品，可以适当减少裂解液的用量。)
C.用玻璃匀浆器匀浆，也可以把组织样品冷冻后液氮研磨，研磨充分后加入裂解液进行裂解。
D.充分裂解后，10000-14000g离心3-5分钟，取上清，即可进行后续的PAGE、Western和免疫沉淀等操作。每20mg冻存的小鼠肝脏组织用200微升本裂解液裂解后获得的上清，其蛋白浓度约为15-25mg/ml，不同状态的不同组织有所不同。
E.如果组织样品本身非常细小，可以适当剪切后直接加入裂解液裂解，通过强烈漩涡振荡使样品裂解充分。然后同样离心取上清，用于后续实验。直接裂解的优点是比较方便，不必使用匀浆器或研磨设备，缺点是不如匀浆或研磨那样裂解得比较充分。
注：RIPA裂解液的裂解产物中经常会出现一小团透明胶状物，属正常现象。该透明胶状物为含有基因组DNA等的复合物。在不检测和基因组DNA结合特别紧密的蛋白的情况下，可以直接离心取上清用于后续实验；如果需要检测和基因组结合特别紧密的蛋白，则可以通过超声处理打碎打散该透明胶状物，随后离心取上清用于后续实验。如果检测一些常见的转录因子，例如NF-kappaB、p53等时，通常不必进行超声处理，就可以检测到这些转录因子。
【注意事项】
1.本品仅供科研使用，不可用于临床诊断。
2.如产品出现异常，请勿使用。